六銳膠囊對葡萄膜炎大鼠血清SOD、MDA和NT-3的影響

眼科新進(jìn)展 2016年4月 第36卷 第四期334-335頁 《六銳膠囊對葡萄膜炎大鼠血清SOD、MDA和ND3含量的影響》

中國科技論文統(tǒng)計(jì)源期刊（中國科技核心期刊）

 

六銳膠囊對葡萄膜炎大鼠血清SOD、MDA和NT-3的影響

 

[摘要]目的：探討六銳膠囊對葡萄膜炎大鼠血清超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）和神經(jīng)營養(yǎng)素-3（NT-3）的影響。方法：采用光感受器間維生素A類結(jié)合蛋白（IRBP1177-1191）制備葡萄膜炎大鼠模型，造模第2天開始給藥，第13天心臟取血，采用ELISA檢測六銳膠囊對EAU大鼠抗氧化作用SOD、MDA的表達(dá)變化和視神經(jīng)保護(hù)作用NT-3的表達(dá)變化。結(jié)果：六銳膠囊不同劑量組、模型對照組的SOD和NT-3水平低于對照組，六銳膠囊不同劑量組的SOD 和NT-3水平高于模型組，且隨六銳膠囊劑量的增加，SOD和NT-3水平增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。六銳膠囊不同劑量組、模型對照組的MDA水平高于對照組，六銳膠囊不同劑量組的MDA水平低于模型組，且隨六銳膠囊劑量的增加，MDA水平上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：六銳膠囊可增加葡萄膜炎大鼠血清SOD 和NT-3水平，降低血清MDA水平，具有抗氧化和視神經(jīng)保護(hù)作用。

[關(guān)鍵詞]六銳膠囊，葡萄膜炎，血清，超氧化物歧化酶，丙二醛，神經(jīng)營養(yǎng)素-3

葡萄膜炎是眼科常見的、反復(fù)發(fā)作的嚴(yán)重致盲性眼病，發(fā)病率高危害性大，在病理上存在葡萄膜、視網(wǎng)膜、視網(wǎng)膜血管及玻璃體的炎癥。在我國大約有400萬同胞罹患此病，并且具有持續(xù)上升的趨勢[1-2]。葡萄膜炎的一個(gè)顯著特點(diǎn)是炎癥反應(yīng)常呈慢性、復(fù)發(fā)性，因此在治療上相當(dāng)棘手[3]。目前，西醫(yī)主要靠長期大劑量糖皮質(zhì)激素及免疫抑制劑治療，易導(dǎo)致許多全身或眼部的嚴(yán)重并發(fā)癥。中醫(yī)藥治療葡萄膜炎具有明顯的優(yōu)勢，尤其對西藥治療無效的葡萄膜炎患者更具優(yōu)勢[4]。六銳膠囊主要由六種藏藥藥物組成，訶子、紅花、巴夏嘎、木香、安息香、人工麝香。六銳膠囊目前已經(jīng)應(yīng)用在臨床并已取得了一定的療效，主要用于血、膽、疬引起的頭痛病，云翳等眼科疾病，旨在清熱涼血，明目退翳[5-6]。本研究光感受器間維生素A類結(jié)合蛋白（IRBP1177-1191）制備葡萄膜炎大鼠為模型，探討六銳膠囊對葡萄膜炎大鼠血清超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase，SOD）、丙二醛（Malonaldehyde，MDA）和神經(jīng)營養(yǎng)素-3（neurotrophin-3，NT-3）的影響。

1  材料與方法

1.1  實(shí)驗(yàn)材料  6~8周雌性Lewis大鼠，體重160~180g，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供（動(dòng)物許可證號：SCXK（京）2006-0009）；六銳膠囊（西安大唐制藥集團(tuán)有限公司提供國藥準(zhǔn)字：Z20090461）；IRBP（1177-1911，氨基酸序列：ADGSSWEGVGVVPDV）購于上海生工生物工程股份有限公司合成；完全弗氏佐劑（Complete Freund’s adjuvant, CFA）購于美國sigma公司；結(jié)核分枝桿菌H37RA（mycobacteriumTuberculosis, TB）美國Difco公司。SOD、MDA和NT-3試劑盒均購于南京建成生物工程研究所。Biotek Elx800酶標(biāo)儀（美國Bio-Tek儀器公司），所有實(shí)驗(yàn)均符合ARVO對于動(dòng)物在眼睛和視覺方面應(yīng)用的要求。

1.2模型制備  將40Leweis只雌性大鼠，隨機(jī)分為5組，每組各8只，分為空白對照組，模型對照組和六銳膠囊低中高劑量組5組。進(jìn)行1周適應(yīng)飼養(yǎng)后模型對照組和六銳膠囊低中高劑量組4組，在大鼠腹腔內(nèi)注射10％水合氯醛注射液（0.5ml/100g）進(jìn)行全身麻醉，皮下注射300μl含有100μgIRBP1177-1191,150μl完全弗氏佐劑，100μg TB及150μl PBS的乳化液，在兩足墊處、尾根部兩側(cè)及脊背正中均勻注射5點(diǎn)[7]。

1.3給藥方式與方法  免疫后第2天開始用藥，空白對照組和模型對照組給予2mL的生理鹽水，六銳膠囊低中高劑量組分別給予含0.4g、0.8g和1.2g六銳膠囊的2mL藥液。連續(xù)灌胃給藥12天。

1.4指標(biāo)檢測 于免疫后第13天心臟取血4mL，3000 r/min的速度離心15 min，分離血清，-80℃保存待測。參照SOD、MDA和NT-3試劑盒說明書，采用用酶聯(lián)免疫吸附法在450nm處測OD值，計(jì)算其濃度。

1.5統(tǒng)計(jì)分析  采用SPSS19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以（±S）表示，采用t檢驗(yàn)比較組內(nèi)和組間差異，P<0.05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。

2結(jié)果

2.1各組大鼠血清SOD的比較  空白對照組大鼠血清SOD含量水平最高，模型對照組血清SOD含量水平最低，隨六銳膠囊劑量的增加，血清SOD含量增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

表1葡萄膜炎大鼠血清SOD、MDA和NT-3比較（±S）

組別	只數(shù)	SOD（U/mL）	MDA（nmol/mL）	NT-3（μg/mL）
空白對照組	8	180.12±12.36	3.62±0.13	103.25±14.82
模型對照組	8	119.37±8.91●	10.81±1.03●	63.58±7.61●
六銳膠囊低劑量組	8	136.52±9.78●△	9.18±0.76●△	79.35±8.61●△
六銳膠囊中劑量組	8	153.27±10.67●△★	7.21±0.56●△★	86.91±9.13●△★
六銳膠囊高劑量組	7	168.79±11.36●△★■	4.83±0.27●△★■	97.28±11.29●△★■

注：與空白對照組比較，●P＜0.05；與模型對照組比較，△P＜0.05；與六銳膠囊低劑量組比較，★P＜0.05；與六銳膠囊中劑量組比較，■P＜0.05。

2.2各組大鼠血清MDA的比較  空白對照組大鼠血清MDA含量水平最低，模型對照組血清MDA含量水平最高，隨六銳膠囊劑量的增加，血清MDA含量降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

2.3各組大鼠血清NT-3的比較  空白對照組大鼠血清NT-3含量水平最高，模型對照組血清NT-3含量水平最低，隨六銳膠囊劑量的增加，血清NT-3含量增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

3討論

葡萄膜炎病因不清，感染、外傷等多種因素均可引起葡萄膜炎，近來認(rèn)為自身免疫紊亂可能參與了疾病誘導(dǎo)。目前葡萄膜炎尚無理想治療方法，其治療主要是非甾體消炎藥和糖皮質(zhì)激素等免疫抑制劑，往往常會導(dǎo)致許多嚴(yán)重的并發(fā)癥。祖國醫(yī)學(xué)將葡萄膜炎稱為“瞳神緊小”。其發(fā)病機(jī)理是：肝膽火熾、熱毒亢盛、火邪燔灼循經(jīng)上傳、上犯于目或挾風(fēng)、熱、痰、濕所致[8]。用中藥從整體水平進(jìn)行調(diào)理，使機(jī)體重新達(dá)到陰陽平衡，具有良好的治療作用[9]。六銳膠囊主要由六種藏藥藥物組成，訶子、紅花、巴夏嘎、木香、安息香、人工麝香。六銳膠囊目前已經(jīng)應(yīng)用在臨床并已取得了一定的療效，主要用于血、膽、疬引起的頭痛病，云翳等眼科疾病，旨在清熱涼血，明目退翳?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究證明[10-11]，六銳膠囊中的有效成分沒食子酸具有抗氧化、抗病毒和抗血小板聚集等作用，藏紅花提取液是經(jīng)自由基與超氧自由基的強(qiáng)效清除劑，能夠抗氧化反應(yīng)，改善線粒體功能，抑制視神經(jīng)細(xì)胞凋亡。結(jié)合六銳膠囊的臨床應(yīng)用，我們推測六銳膠囊具有抗氧化和視神經(jīng)保護(hù)作用。因此，本研究探討六銳膠囊對葡萄膜炎大鼠血清SOD、MDA和NT-3的影響，為臨床治療提供依據(jù)。

氧化應(yīng)激是葡萄膜炎發(fā)病的機(jī)制之一，氧化應(yīng)激是指機(jī)體在遭受各種有害刺激時(shí)，體內(nèi)活性分子生成過多，造成體內(nèi)清除氧化物不及時(shí)，從而導(dǎo)致細(xì)胞和組織損傷的生理和病理反應(yīng)。SOD是機(jī)體清除氧自由基的主要酶類，其活性高低可以反映組織清除氧自由基的能力。MDA是脂質(zhì)代謝產(chǎn)物，MDA含量可以反映出組織中氧自由基含量的變化以及氧自由基引起脂質(zhì)過氧化程度，從而判斷疾病損傷程度[12]。NT-3主要存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元，具有支持神經(jīng)兒存活、調(diào)節(jié)和維持神經(jīng)兒突觸功能，促進(jìn)損傷神經(jīng)的再生和修復(fù)等作，對多種神經(jīng)元均有重要作用[13]。本研究發(fā)現(xiàn)，隨六銳膠囊劑量的增加，血清SOD含量增加，血清MDA含量降低，血清NT-3含量增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說明六銳膠囊可以增加葡萄膜炎大鼠血清SOD的含量，降低MDA的含量及增加NT-3含量。方中訶子降火、下氣功效，紅花活血通經(jīng)、散疲止痛，巴夏嘎清熱愈瘡、生肌止血、活血明目之功效，木香及安息香的補(bǔ)氣止痛、促運(yùn)氣血、調(diào)中導(dǎo)滯之功效相關(guān)[14]?，F(xiàn)代藥理研究表明，六銳膠囊可顯著改善血液粘稠度，促進(jìn)毛細(xì)血管通透性恢復(fù)正常，增強(qiáng)毛細(xì)血管杭炎作用。六銳膠囊可增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化能力，調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫狀態(tài)，促進(jìn)葡萄膜炎癥的消退，提高患者的視功能密切相關(guān)[15]。

綜上所述，六銳膠囊可增加葡萄膜炎大鼠血清中SOD和NT-3的含量，降低血清MDA的含量，具有抗氧化和保護(hù)視神經(jīng)的功效。

參考文獻(xiàn)

[1]郭俊國,畢宏生,解孝鋒.中西醫(yī)結(jié)合治療前葡萄膜炎臨床文獻(xiàn)評價(jià)[J].山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2012,(2): 97-99.

[2]  解孝鋒,郭俊國,畢宏生,等.清開靈滴眼液治療慢性葡萄膜炎的臨床觀察[J].國際眼科雜志,2010,10(6):1171-1172.

[3] 周丹,畢宏生,魏麗娟,等.中醫(yī)滋陰兼以活血法在復(fù)發(fā)性葡萄膜炎中的臨床應(yīng)用[J].國際眼科雜志,2010,10(5):966-967.

[4] 畢宏生,解孝鋒,吳建峰等.中醫(yī)藥綜合治療葡萄膜炎臨床評價(jià)分析[J].國際眼科雜志,2009,09(4):749-751.

[5] 武向鋒,劉俊,沈娟,等.六銳膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào),2009,25(5):410-414.

[6] 蘭薇,王世祥,房敏峰,等.蒙藥廣棗中沒食子酸在正常和氣滯血瘀家兔體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究[J].中國民族醫(yī)藥雜志,2007,13(6):48-49.

[7] 李洋,崔彥,畢宏生,等.實(shí)驗(yàn)性自身免疫性葡萄膜炎動(dòng)物模型[J].國際眼科縱覽,2011,35(4):263-266.

[8]  唐凱,郭大東,張蓮等.龍膽瀉肝湯對大鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性葡萄膜炎的治療作用[J].眼科新進(jìn)展,2015,35(4):305-309.

[9] 蘭芳,何蓉蓉,姚楠等.葉黃素對小鼠葡萄膜炎氧化應(yīng)激狀態(tài)的改善作用[J].中國藥理學(xué)通報(bào),2010,26(9):1257-1258.

[10] 鄧穎,郭志剛,曾兆麟,等.藏紅花的藥理研究進(jìn)展[J].中國中藥雜志,2002,27(8):565-568.

[11] 楊婷婷,鄧娟,梁雪梅等.葡萄膜炎患者血清膽紅素、尿酸及白蛋白濃度分析[J].眼科新進(jìn)展,2014,34(4):358-360.

[12] 張震,尹玉,閻磐石,等.特發(fā)性葡萄膜炎患者紅細(xì)胞免疫粘附功能研究[J].醫(yī)藥論壇雜志,2005,26(4):8-9.

[13] 張燕青,曾園山,曾湘等.神經(jīng)營養(yǎng)素-3基因修飾雪旺細(xì)胞和神經(jīng)營養(yǎng)素-3受體基因修飾脊髓間充質(zhì)干細(xì)胞聯(lián)合移植促進(jìn)脊髓損傷大鼠神經(jīng)元存活的研究[J].中國康復(fù)醫(yī)學(xué)雜志,2009,24(7):577-581,插1.

[14] 王軍.六銳膠囊聯(lián)合視網(wǎng)膜激光光凝治療糖尿病視網(wǎng)膜病變臨床研究[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥,2015,11(12):100-102.

[15] 羅曉陽.六銳膠囊治療眼底出血及滲出療效探討[J].中醫(yī)眼耳鼻喉雜志,2014,4(1):22-24,37.